RNA模板的制备

一、RNA提取常用方法

在生物医药研究中，RNA提取是关键步骤。常见的RNA提取方法包括传统的酚-氯仿抽提法与柱式抽提法。以下将以
尊龙凯时人生就博为例，介绍这两种方法的操作流程与注意事项。

二、酚-氯仿抽提法

以Vazyme产品RNAisolater Total RNA Extraction Reagent（Vazyme#R401）为例，操作步骤如下：

1. 材料准备

准备以下材料：氯仿（CHCl₃）、异丙醇、75%乙醇（使用DEPC水配制），以及DEPC水。

2. 样本制备

注意，过多的样本量可能导致样本裂解不充分，从而降低产物纯度。以下是不同样本类型的最大样本量：

• 贴壁细胞：弃去培养液，PBS洗涤一次。每10cm²培养面积的细胞需加入1-3ml RNAisolater，确保覆盖细胞表面，然后用移液器轻轻吹打细胞。
• 悬浮细胞：将收集的细胞用PBS洗涤，一般每5×10⁶-10⁷个细胞需加入1ml RNAisolater，尽量确保无明显颗粒。
• 动物组织：进行液氮研磨，研磨后立即转移至离心管，加入RNAisolater，使样品完全融化后继续吹打至透明。

三、柱式抽提法

以Vazyme产品FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit（Vazyme#RC101/RC111）为例，操作步骤如下：

1. 材料准备

准备以下材料：β-巯基乙醇、无水乙醇、RNase-free枪头等。

2. 样本处理

对于贴壁细胞，直接使用Buffer RL1（加入β-巯基乙醇）进行裂解；若使用胰酶消化，收集细胞后加入Buffer RL1，所需的比例为每2-5×10⁶个细胞加入500μl Buffer RL1，轻轻混匀直至无细胞团块。

悬浮细胞则需离心收集后加入Buffer RL1，比例同样为每2-5×10⁶个细胞加入500μl，充分混匀并在操作完成后可置于-70℃保存。

四、关于尊龙凯时人生就博

尊龙凯时人生就博致力于为生物医药领域提供优质的产品和专业的技术服务，特别在基因治疗和细胞治疗方面。我们位于广州，服务范围覆盖全国，能够迅速提供最前沿的专业资讯及全方位的产品与物流服务。凭借专业的技术力量和广泛的人脉资源，我们与全国主要城市的众多合作伙伴保持着紧密联系，始终为用户提供强大的技术支持。

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