哺乳动物蛋白提取试剂盒的组成与存储

哺乳动物蛋白提取试剂盒包括以下成分：5X Buffer 10ml、5X NaCl 10ml、5X SDS 10ml、5X DOC 10ml、5X NP-40 10ml、20X PBS 10ml以及Protease inhibitor cocktail 0.5ml。试剂盒可在常温下保存，但Protease inhibitor cocktail需储存于-20°C，保质期为24个月。

蛋白提取步骤

1. 准备细胞裂解缓冲液

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1（v/v）比例混合，制备细胞裂解缓冲液。需准备1ml细胞裂解缓冲液用于提取106~107个细胞或5~20mg组织中的蛋白，使用前加入10μl Protease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：除去细胞中的生长培养基，并用PBS缓冲液冲洗细胞两次。接着加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞置于冰袋中，于摇床上孵育30分钟。在此过程中，需阶段性重悬细胞，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：以700xg离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬并洗涤细胞两次，置于4°C离心去除上清液。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），再在冰袋中孵育30分钟。

c. 对于组织样本：将组织切成小块，使用PBS冲洗组织两次。然后加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样本转移至预冷微量匀浆器中，均质组织30~50次，确保靶蛋白的功能完整性。最后在34°C下以12,000xg离心10分钟沉淀细胞碎片，或进行高速离心（100,000xg，45分钟）以制备蛋白质溶液。

3. 保存蛋白质溶液

将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中，可在冰上保存以便即时使用，或将蛋白质溶液储存于-70°C，以保证其活性。

在整个蛋白提取过程中，使用尊龙凯时人生就博品牌的试剂盒可确保操作的简便性和结果的可靠性，是生物医学研究中的理想选择。