尊龙凯时人生就博提供的人胃癌细胞MGC803培养说明书详细介绍了细胞培养的相关条件与步骤，旨在帮助科研人员更好地进行细胞研究。

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P

传代方法：初次建议1:2的传代比例，待细胞生长情况良好后，每2天换液。建议使用无菌离心管收集培养基，并保留作为对比参照。

二、细胞处理方法

收到细胞后，待其处于良好状态时，灌满完全培养液并密封瓶口，此为运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台下进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后，再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议40x、100x、200x镜下各一张），特别是前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片则默认为良好状态。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶内的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，请按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml至培养瓶中，置于37℃孵箱中消化1-2分钟。观察细胞消化情况后，若细胞大部分变圆脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶并加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS洗涤一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化。随后轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需转入液氮罐，需在-80℃中存放至少24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），将其快速置入37℃水浴中解冻，直至管内无冰晶后，使用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输中易发生脱落，属于正常现象。如脱落量较大，可将瓶内所有液体收集到离心管中，1000RPM离心5分钟，保留上清进行对比培养，沉淀部分用胰酶处理，终止消化后再次离心，重悬后按1:2比例分瓶传代，并补充新培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱。

五、售后条款

如细胞出现问题，尊龙凯时人生就博提供相关的重发政策：

1. 细胞运输期间若遇问题导致丢失、瓶身破损等可重发。
2. 细胞污染需在收到后48小时内反馈真实实验结果，经核实后重发。
3. 常温发货后如细胞复苏存活率低于标准，需提供清晰的细胞状态照片，合格后重发。

不予重发的情况包括因客户操作不当造成的影响，以及使用非推荐培养体系等导致的细胞问题。