细胞复苏技巧，尊龙凯时人生就博来支招

细胞培养技术是从体内组织提取细胞，在体外模仿体内环境以促使细胞生长和繁殖，同时保持其结构及功能的科学方法。培养物可以是单个细胞或细胞系，而细胞复苏是细胞培养中至关重要的一环。接下来，详细介绍细胞复苏的步骤与注意事项。

01、细胞复苏的原理

细胞复苏是指将储存在液氮或-70℃冰箱中的细胞解冻并重新培养，使其恢复生长的过程。在恢复到常温时，细胞形态和生化反应立即恢复正常。复苏过程中要快速升温，原则是“慢冻快融”，以防止水分进入细胞形成冰晶，从而影响细胞的存活率。

02、细胞复苏的实验步骤

1. 从液氮罐中取出冻存管，置于-80℃冰箱数分钟，然后迅速放入37℃水浴中，不时摇动，使其在2分钟内急速融化，注意不要将冻存管的口浸入水中，以避免污染，复苏过程中一般细胞死亡率约为25%；

2. 完全融化后，使用75％的酒精擦拭冻存管外部以进行灭菌，然后打开盖子，将细胞悬液缓慢加入预先准备好的培养液中的T25或T75培养瓶，放置在37℃、5% CO₂培养。如果细胞需去除冷冻保护剂，用移液枪将细胞悬液注入15mL无菌离心管中，加入5ml完全培养基，根据细胞类型选择合适的低速离心5分钟，弃去上清，最后加入2-3mL预热的完全培养基，轻轻混匀以确保细胞完全重悬；

3.经过适当稀释后，将重悬细胞接种到培养皿或T25/T75培养瓶中，在37℃、5% CO₂条件下培养，24小时后更换新鲜培养基以去除死细胞，细胞生长到80-90%融合时进行传代。

03、细胞复苏的注意事项

1. 取冻存细胞时要做好防护措施，佩戴防冻手套和护目镜。如冻存管密封不严，液氮可能被吸入，而解冻时气温迅速上升可能导致爆炸。

2. 在水浴中复苏细胞时，使用镊子夹住冻存管并适当摇动，以便加热均匀，速度越快越好，最大程度保持细胞活力，并防止水浴水进入冻存管造成细胞污染。

3. 打开细胞冻存管前要用酒精棉球消毒并晾干，确保无菌操作，复苏后应尽量在4℃冰盒中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。

4. 解冻的时间要控制在2分钟以内，整个过程应避免吹打细胞产生气泡，导致细胞复苏后的生长状态不佳。

5. 复苏细胞时尽量避免冻存管接缝处沾水，以防支原体污染，实验室要定期用过氧化氢消毒，如发现细胞小黑点增多，应及时用支原体检测试剂盒检测并清除。

04、如何避免冻存管爆炸

1. 选择高质量的进口内旋冻存管，确保拧紧盖子，防止液氮进入管内，日常使用的细胞应存放在-80℃冰箱中。

2. 冻存细胞时，尽量增加冻存液的用量，例如2ml冻存管加18ml冻存液，保留少量空间。

3. 取细胞时佩戴手套和防护眼镜，准备好镊子，避免手直接接触冻存管造成冻伤或爆炸。

4. 从液氮中取出细胞时，先在液氮罐上方的蒸汽中放置一会儿再取出，使剩余的液氮回流至罐内，避免冻伤并防止细胞因快速升温而爆炸。

通过遵循以上细胞复苏技巧，您能够有效提高细胞存活率，顺利进行后续实验，尊龙凯时人生就博始终陪伴在您身边，助力您的科研之路。